斯坦福大学遗传学系，药理学系的几位学者合作，开发出了一种为原位蛋白质工程重利用体细胞超突变的新技术—— CRISPR-X，这将能帮助科学家们创建复杂的原始遗传突变文库，分析完善蛋白质工程。
目前通过定向进化法分析蛋白功能，进行蛋白质工程研究受限于整体诱变，或DNA文库构建方面的技术问题。这篇文章针对于此，研发出了一种为原位蛋白质工程重利用体细胞超突变的新技术：CRISPR-X。
研究人员催化激活休眠的 dCas9，令其召集携带MS2修饰sgRNAs的胞嘧啶脱氨酶（cytidine deaminase，AID）突变，从而能特异化诱变内源靶标（限制脱靶伤害）。这样就能生成多个不同的点突变文库，同时靶向多个基因组位点。
为了验证这种方法，研究人员诱变了GFP，筛选了光谱转移突变，比如EGFP，而且他们还突变了癌症治疗药物万珂（Bortezomib）的靶标——PSMB5，Bortezomib是目前批准上市的唯一治疗恶性肿瘤的蛋白酶体抑制剂，能特异性抑制哺乳动物细胞内26S蛋白酶体的类胰凝乳蛋白酶。
结果他们从中找到了引发Bortezomib耐药性的已知和全新的突变。同时研究人员还利用超活化AID突变，诱变了其转录起始位点上游和下游的位点。
这些研究均表明 CRISPR-X 是一种强大的工具，能帮助科学家们创建复杂的原始遗传突变文库，分析完善蛋白质工程。
来源：生物通 作者：张迪
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